Хлорохин: "Новое" средство для лечения заболеваний рыб

Автор: Джей Хемдал

Не будучи панацеей или каким-то волшебным лекарством, хлорохин переживает новую волну популярности в плане применения в «рыбных» аквариумах (fish-only) и карантинных системах для лечения различных проблем, начиная от криптокариона до инвазии айптазий.

В начале 1970х годов, когда мне было лет 13, или около того, Cryptocaryon irritans ("морской ихтиофтириоз") и Amyloodinium ocellatum (оодиниум или "морской бархат") представляли собой меньшую угрозу для моих рыб, нежели сейчас, когда мне, как куратору аквариума, приходится каждую рыбу выдерживать на карантине. Причиной стал продукт под названием Marex от Aquatronics Corporation (их деятельность уже давно прекращена). В те времена Marex был своего рода волшебным лекарством – однократная доза за $1.99 предупреждала развитие многих заболеваний у рыб в 190-литровом аквариуме, кроме того, способствовала уничтожению неприглядных водорослей, которые в то время бесконтрольно росли по всем декорациям аквариума! Когда компания свернула свой бизнес, я начал использовать другие препараты. На протяжении 25 лет для контроля ихтиофтириоза и прочих протозойных заболеваний я два раза в день добавлял медь (в ионной форме), определяя ее количество при помощи спектрофотометра. Медь – это медленно действующее средство, где разница между терапевтической дозой и дозой, способной нанести вред некоторым видам рыб, совсем незначительная. Казалось, это был оптимальный способ держать на карантине или лечить острые заболевания у рыб. Вспоминая те времена, когда я был моложе, я провел небольшое исследование и обнаружил, что активный ингредиент Marex - хлорохин, с которым я был неплохо знаком, поскольку он использовался в других общественных аквариумах. Заполучив некоторое количество этого медикамента пять лет назад, я начал применять его для лечения заболеваний у рыб. Некоторые аквариумисты также обратили свое внимание на это средство, зачастую называя его «ХФ» - хлорохина фосфат. В данной статье приводится дополнительная информация для более эффективного использования «нового» медикамента – всегда полезно иметь в арсенале несколько вариантов.

Зеленый хромис с уронемой (Uronema), которую можно было бы вылечить при помощи хлорохина,

если бы лечение было начато своевременно.

Химические свойства

Хлорохин был разработан в лаборатории Bayer для использования в медицине в 1930х годах. Изначально считалось, что он был слишком токсичен для какого-либо практического применения, но спустя десятилетия, в процессе клинических тестирований, была доказана его эффективность в качестве средства от малярии. Широкомасштабное применение этого препарата способствовало тому, что организмы, вызывающие малярию, стали устойчивы к этому медикаменту, соответственно, необходимо было искать новые средства лечения малярии.

Лекарство представлено на рынке в трех формах:

Chloroquine diphosphate (Aralen): C₁₈H₂₆ClN₃ ^. 2H₃PO₄
Chloroquine hydrochloride (Aralen HCL): C₁₈H₂₆ClN₃ ^. 2HCl
Chloroquine sulfate (Plaquenil): C₁₈H₂₆ClN₃ ^. H₂O₄S

Основной компонент хлорохина также встречается под следующим названием: 7-chloro-4-[[4- (diethylamino)-1-methylbutyl]amino] quinolone. Для использования в аквариумах этот препарат чаще всего встречается в форме дифосфатов. Это соединение представляет собой мелкий порошок, хорошо растворимый в воде. В сухой среде вещество способно вырабатывать электростатистический заряд, при этом гранулы легко переносятся по воздуху и прилипают к расположенным поблизости предметам. В связи с этим отмерить небольшое количество вещества может быть сложно, поскольку оно «прилипает» к контейнеру, весам и близко расположенным предметам. Перед тем, как добавлять хлорохин в аквариум, необходимо обязательно растворить необходимое количество вещества в дистиллированной воде.

Английское произношение этого названия варьируется: "KLOR-oh-kwin" и "Klor-oh-KWEEN", при этом аквариумисты чаще используют первый вариант, а второй упоминается на сайтах, где приводится транскрипция слов.

Применение и дозировка

Как правило, доза хлорохина варьируется от 10 до 20 мг на литр (мг/л); при этом 15 мг/л считается «стандартной дозой» (Hemdal 2006). Примечание: в большинстве случаев, растворы, измеряемые в «миллиграммах на литр» эквивалентны растворам, измеряемым в «частях на миллион» или ppm.

Доза 10 мг/л должна использоваться в качестве «превентивной меры» для карантина (не в случае острого заболевания) или для лечения чувствительных видов (хотя нам не так много известно о чувствительности различных видов рыб к этому медикаменту). Доза 15 мг/л считается нормальной для лечения большинства протозойных заболеваний, тогда как доза 20 мг/л может использоваться в борьбе со сложными в лечении инфекциями Uronema marinum.

Hach DR5000 UV спектрофотометр, справа – non-UV DR-2000.

Первым этапом в подготовке использования любого медикамента для аквариума в определенной дозировке является определение реального объема воды в аквариуме. Зачастую реальный объем меньше указанного производителем (или же больше, в случае, если в системе используется самп). Самый точный способ определения объема аквариума – измерить, какое количество воды необходимо для заполнения всей системы, со всеми компонентами. Поскольку такой вариант возможен, как правило, только при первом заполнении аквариума, в большинстве случаев получить достаточно точные результаты можно, используя следующий метод (данный способ подразумевает измерение объема в америк. единицах в сочетании с метрическим дозированием):

• Измерьте (в дюймах) длину, ширину и высоту воды в аквариуме от поверхности субстрата до поверхности воды, а также между передней и задней панелью аквариума и по ширине аквариума. Перемножьте три полученных показателя, чтобы получить общий объем в кубических дюймах, а затем разделите полученный результат на 231, чтобы определить объем в галлонах (в 1 американском галлоне 231 кубический дюйм).

• Далее необходимо вычесть объем всех декораций; как правило, в обычном морском аквариуме декорации из искусственных кораллов и камней вымещают примерно 15% объема воды, поэтому необходимо умножать общий объем (полученный на 1ом этапе) на 0.85.

• Воспользуйтесь этим же методом для определения объема слоя грунта (если он имеется в аквариуме), но результат умножать необходимо на 0.30, поскольку лишь около 30% грунтового слоя составляет вода, оставшийся объем – непосредственно грунт.

• Воспользуйтесь этим же способом для измерения объема сампа (если он имеется).

• За исключением очень крупных систем, количество воды в системе фильтрации можно считать незначительным, но в случае, если в системе используется большой фильтр, вы можете добавить пару галлонов к полученным результатам.

• Сумма всех полученных показателей – полезный объем аквариума в галлонах.

• После определения объема аквариумной системы, умножьте полученное количество галлонов на необходимую дозу медикамента (в мг/л или частях на миллион/промилле). Разделив результат на 266, вы получите необходимое для добавления в систему количество медикамента в граммах.

• Для большей точности обязательно проводите все измерения повторно. Если результаты будут расходиться, остановитесь и попробуйте определить, на каком этапе была допущена ошибка.

При дозировке медикаментов могут возникнуть серьезные проблемы, если в процессе подсчетов место десятичной точки (запятой) было смещено. Рассчитанная с ошибкой доза может оказаться в несколько раз больше или меньше необходимой. Аквариумисты, не знакомые с конкретным медикаментом могут не отдавать себе отчета, что рассчитанное ими количество медикамента существенно отличается от правильного. В качестве ориентира: для дозирования на 100 галлонов нетто аквариумной воды и дозе хлорохина 15 мг/л вы добавите 15.6 гр хлорохина (100 галлонов*15 мг/л /266=5.639, этот показатель мы округляем до 5.6 грамм).

У аквариумистов-любителей могут возникнуть сложности с дозированием незначительного количества медикамента для маленьких аквариумов. Избегайте приблизительных расчетов и не пытайтесь использовать способы перевода объема в вес. Небольшие электронные весы стоят относительно недорого, но их шкала может оказаться недостаточно дробной для измерения количества медикамента в миллиграммах. Для повышения точности можно сделать раствор и затем добавить небольшое количество раствора в аквариум. Почему этот способ хорошо работает? Как правило, аквариумистам-любителям проще отмерять небольшие объемы жидкости, чем взвешивать небольшое количество порошка. Например, если необходимо обработать аквариум объемом 10 галлонов хлорохином концентрации 10 мг/л, в аквариум надо добавить 376 мг медикамента – совсем небольшое количество, отмерять и взвешивать которое будет проблематично. Если вам проще отмерить 1 грамм порошка, вы можете растворить его в 12 чайных ложках дистиллированной воды, а затем добавить в аквариум (речь идет об объеме 10 галлонов) 4 ½ чайных ложки раствора. Для повышения точности измерений, можно приобрести медицинскую мерную ложку. Ее можно использовать практически также, как и градуированный цилиндр для определения точного количества раствора. В нашем примере, вы добавляете один грамм хлорохина в 100 миллилитров дистиллированной воды, а затем добавляете в аквариум 37.6 мл полученного раствора.

Обычные измерительные/мерные ложки вполне подойдут для дозирования

раствора хлорохина для небольших аквариумов.

Почему стоит уделять столько внимания тщательной дозировке хлорохина, когда предел погрешности у хлорохина в концентрации 15 мг/л составляет 33%? Причина состоит в том, что существует два варианта ошибки: при измерении объема аквариума и при взвешивании самого медикамента. Небольшие ошибки могут компенсировать друг друга, но ошибки в одном направлении могут привести к тому, что в аквариум будет добавлено недопустимо большое количество хлорохина.

Помимо контроля протозойных паразитов, хлорохин также используется для избавления от некоторых метазойных (многоклеточных) паразитов у рыб. В аквариуме Джорджии хлорохин в концентрации всего лишь 10 мг/л использовался для контроля инвазий турбеллярий (Тоня Клаус, из личного общения). Эти черви оказались невосприимчивы к Празиквантелу (Praziquantel) и формалину, поэтому потребовался альтернативный вариант воздействия на них.

Однократная доза хлорохина в пропорции 15 мг/л оказалось эффективной для избавления от Aiptasia sp. в течение 48 часов. В одном исследовании, в течение двух месяцев с момента добавления хлорохина повторной инвазии не наблюдалось (личные наблюдения). Тем не менее, этот способ нельзя использовать в аквариумах, где обитают другие беспозвоночные, поскольку такая доза способна также уничтожить водоросли и губки, обитающие поблизости от Aiptasia sp.

Чтобы изолировать медикамент от чувствительных беспозвоночных, некоторые аквариумисты вводили его рыбам орально. Хлорохин очень горький, и если его вкус не замаскировать другим сильным вкусом, вскоре рыбы научатся избегать его. Кроме того, чтобы такой способ сработал, рыбы должны питаться в обычном режиме, тогда как больные рыбы зачастую отказываются от корма. И еще, в случае с аквариумными рыбами очень сложно контролировать дозу препарата для приема внутрь. Лекарство необходимо смешать с желатиновой основой в соотношении 6-10 мг лекарства на каждый грамм корма, эту смесь необходимо скармливать рыбе ежедневно в количестве 3% от массы ее тела – лишь немногие (если вообще такие найдутся) аквариумисты в курсе веса своих рыб.

Согласно многочисленным данным, активированный уголь способен удалить хлорохин из аквариумной воды по окончании лечения, но будьте внимательны: использование угля может стать причиной развития эрозии в районе головы или боковой линии у морских рыб-хирургов (Hemdal & Odum 2011). Если вы решили воспользоваться углем для выведения хлорохина, рекомендуется использовать высококачественный гранулированный уголь, промыть его перед использованием деионизированной водой и после использования удалить весь уголь из аквариума. Количество угля для удаления хлорохина можно приблизительно подсчитать. Начальное количество 4-6 грамм хорошо промытого угля на галлон аквариумной воды, помещаем в сетчатый мешок с мелкими отверстиями и добавляем в аквариумный фильтр на 48 часов. Если в аквариуме обитают чувствительные беспозвоночные, то имеет смысл по окончании лечения заменить всю воду.

Для определения содержания хлорохина в воде не существует тестов, как для многих медь-содержащих препаратов. Общественные аквариумы и лаборатории, у которых есть доступ к УФ-спектрофотометру, могут определять содержание хлорохина непосредственно в воде. Как этот способ работает: при 329 нм, хлорохин в воде поглощает УФ свет пропорционально концентрации хлорохина. Для проверки образца необработанной воды используется кварцевая кюветка, светопроницаемая для УФ. Далее, проверяются образцы воды с различной концентрацией хлорохина, 2.5, 5, 10, 20 и 25 мг/л и измеряется коэффициент пропускания в процентном отношении для каждого образца. По мере графического отображения полученных результатов, можно измерить концентрацию хлорохина (в пределах этого ряда) в любом образце воды. Поскольку в воде могут присутствовать другие органические вещества, также способные поглощать УФ лучи, оптимальный вариант – создать стандартную кривую для каждой отдельной системы перед началом лечения.

В одном из исследований по проверке способности угля удалять хлорохин, один яркий пример продемонстрировал увеличение оптической плотности при 329 нм поле фильтрации через уголь в течение 24 часов. Поскольку содержание хлорохина не могло увеличиться, был сделан вывод: что-то из угля растворилось в воде и повлияло на результаты. Однако, в этом случае было невозможно определить, способствовал ли уголь удалению хлорохина, поэтому вопрос о подобных свойствах угля все еще остается открытым. В другом исследовании, в литре дистиллированной воды растворили 20 мг хлорохина. Далее этот образец обрабатывался в течение недели 4 гр промытого активированного угля. При 329 нм, согласно стандартной кривой, содержание хлорохина уменьшилось на 5 мг/л. Поскольку что-то в активированном угле влияет на измерение содержания хлорохина, сложно понять, как были получены и обоснованы данные о способности угля удалять хлорохин, по крайней мере, в случае использования УФ спектрофотометра.

Пример четырех последовательных дозирований хлорохина,измеренных при помощи

УФ спектрофотометра Hach. Результаты: оптическая плотность в процентном отношении

(противоположно процентному отношению коэффициента пропускания) при 329 нм.

Линейное отображение тенденции может использоваться в последующих тестах

для определения содержания хлорохина в аквариумной воде.

Предварительные лабораторные исследования

Два основополагающих лабораторных исследования были проведены с целью определить эффективность фосфата хлорохина в качестве возможного средства для лечения против инфузорий Uronema marinum (Hemdal 2010). Уронема (Uronema) – хорошо известные инфузории, на которые сложно воздействовать, поскольку эти паразиты проникают под кожу рыб и таким образом изолируют себя от препаратов, добавленных в воду, в частности, формалина, меди и пониженной солености. Эти эксперименты продемонстрировали эффективность этого медикамента в борьбе с уронемой, если препарат добавляется в воду, но неизвестно, достаточное ли количество вещества потреблялось бы рыбами, чтобы поднять уровень его содержания в крови до терапевтического.

В первом эксперименте, тело небольшой рыбы-попугая, погибшей от уронемы, было разрезано пополам. Одна часть была помещена в аквариумную воду с добавлением хлорохина 40 мг/л (доза, превышающая нормальную). Спустя шесть часов, количество уронем на этом образце существенно уменьшилось, тогда как количество уронем на контрольном образце (без хлорохина) увеличилось.

Во втором эксперименте, тела двух зеленых хромисов, погибших от острой инфекции, вызванной Uronema, были обработаны хлорохином в дозировке 35 мг/л. Значительное уменьшение количество реснитчатых было отмечено уже в течение трех часов, и лишь один экземпляр Uronema был отмечен на теле одной из рыб спустя восемь часов. Использование тел погибших рыб для био-анализа является проблематичным, поскольку сложно получить необходимые экземпляры, а эксперименты при комнатной температуре нельзя проводить более 24 часов, поскольку ткань начинает разлагаться.

Противопоказания

Обычные для лечения заболеваний рыб дозы хлорохина являются токсичными для многих беспозвоночных, водорослей и бактерий. Очень высокий уровень содержания аммиака ( > 1 mg/l NH3) был отмечен в нескольких случаях спустя несколько дней-неделю после дозирования хлорохина. Неизвестно, почему это явление встречается только в домашних аквариумах. Одна из гипотез заключается в том, что хлорохин обладает прямым антибактериальным действием на нитрифицирующих бактерий. Еще одно предположение: хлорохин убивает такое большое количество микроскопических организмов в аквариуме, что количество полезных бактерий становится чрезмерным, что приводит к резкому повышению уровня аммиака. Скорее всего, в основе этого явления лежит комбинация этих факторов. Поэтому, используя хлорохин, постоянно отслеживайте показатели содержания аммиака в аквариуме. В пресноводных аквариумах также необходимо отслеживать уровень содержания нитритов.

Складывается впечатление, что ультрафиолетовый свет оказывает влияние на химическое воздействие хлорохина в воде. Этот аспект особенно важен, если в аквариуме используются УФ стерилизаторы. УФ свет является причиной изменения хлорохина, в результате чего аквариумная вода может стать грязно-коричневой (Tiffany Adams, Shedd Aquarium, из личного общения). Можно предположить, что действие вещества также изменяется, поэтому УФ стерилизаторы (и скорее всего, озоновые генераторы) в процессе лечения необходимо отключить. Некоторые аквариумисты бросаются в другую крайность и во время лечения блокируют весь свет, поступающий в аквариум, но в этом нет никакой необходимости, за исключением ситуации, когда аквариум открыт для естественного солнечного света.

Как уже говорилось, применение хлорохина для лечения малярии у людей утратило свою эффективность, поскольку организм, вызывающий это заболевание, выработал устойчивость к этому препарату. Можно лишь предположить, что такой же механизм может лежать в основе выработки устойчивости к хлорохину у организмов, вызывающих заболевания в аквариуме. Если эта проблема рано или поздно возникнет, то скорее всего, она проявится в общественных аквариумах или в резервуарах импортеров, потому что они постоянно используют этот препарат в одних и тех системах с централизованной фильтрацией. Маловероятно, что аквариумисты-любители будут использовать дозирование хлорохина настолько часто, чтобы выработалась устойчивость к нему.

Данные о безопасности фосфата хлорохина сложно интерпретировать. Большая часть информации о токсичности препарата получена из экспериментов по использованию медикамента людьми, принимающими препарат для лечения малярии; повреждения сетчатки, разрушение нервной системы и повреждение печени. Разовое использование количества вещества, обычно применяемого в домашних аквариумах, может привести к раздражению глаз и дыхательных путей. Всегда используйте перчатки, защитные очки и маску при обращении с этим препаратом; храните препарат в защищенном от детей и животных месте.

Связь с фосфатами

В большинстве случаев хлорохин для использования в аквариумах представлен в виде chloroquine diphosphate (в противоположность chloroquine hydrochloride или sulfate). Это означает, что при дозировании хлорохина в аквариумную воду при растворении препарата также попадут фосфаты (PO4). Теоретически, используя молекулярный вес компонентов, хлорохин высвободит около 20% своего веса в виде PO4 . Соответственно, что от обычной дозы хлорохина 20 мг/л можно ожидать, что уровень содержания фосфатов в аквариуме увеличится примерно на 4 мг/л. В результате проведения ряда практических исследований было обнаружено, что при добавлении 20 мг/л хлорохина в дистиллированную воду содержание PO4 увеличивалось на 4 - 6.1 мг/л, несколько больше, чем предполагалось изначально*. При дозировании хлорохина можно воспользоваться следующим правилом: уровень фосфатов увеличится примерно на 20 -30% от общей дозы хлорохина. Соответственно, однократная доза хлорохина 10 мг/л приведет к повышению концентрации PO4 в воде примерно на 2 - 3 мг/л. Такие показатели могут стать причиной для беспокойства владельцев рифовых аквариумов, но поскольку хлорохин обычно применяется в рыбных (fish-only) аквариумах или карантинных системах, остаточный уровень фосфатов не является проблемой, уменьшить этот показатель можно подменами воды.

*Примите во внимание, что уровень содержания фосфатов сложно определить при помощи спектрофотометра; в проведенных экспериментах показания существенно отличались, при этом объяснения таким результатам не было найдено.

Доступность

Новая волна популярности хлорохина для лечения заболеваний у рыб определяет коммерческий источник этого препарата. Общественные аквариумы, закупая хлорохин в больших количествах, не испытывают никаких сложностей, покупая препарат через Интернет по цене около $185 за килограмм. Аквариумистам-любителям было сложно найти хлорохин в небольших количествах, но в связи с возобновлением популярности этого препарата ситуация должна измениться. До тех пор, пока производители не начнут предлагать хлорохин в небольших количествах, вы можете купить этот препарат у своего ветеринара, или объединиться с другими аквариумистами и заказать «оптом». Цены на препарат «без рецепта» сильно отличаются в зависимости от количества: от.185 центов за 1 грамм до $2.40 за 1 грамм. Один грамм хлорохина рассчитан на 18 галлонов воды, если речь идет о концентрации 15 мг/л.

Заключение

Не будучи панацеей или каким-то волшебным средством, хлорохин переживает повторный всплеск популярности в плане использования в рыбных аквариумах ( fish-only) и карантинных системах для лечения различных проблем, от ихтиофтириоза (Cryptocaryon) до инвазии Aiptasia. Хлорохин сохраняет свое действие в аквариумах на протяжении нескольких недель; считается, что хлорохин низкотоксичен и его можно удалить при помощи активированного угля. В критических случаях, концентрацию можно измерить при помощи УФ спектрофотометра и соответственно откорректировать дозу.

Первоисточник: www.advancedaquarist.com

Переведено специально для ReefCentral.ru

Если вы увидели этот материал на другом сайте - значит, он был украден.

Просим сообщать о замеченных фактах на info@reefcentral.ru