Зооксантеллы: биология и научное исследование
19.05.2013
Разделы: Водоросли
Автор: Тим Уиджгерде 

Факт симбиоза кораллов и зооксантелл хорошо знаком аквариумистам. С целью расширения наших знаний в плане биологии зооксантелл, ученые выделили зооксантелл из кораллов-хозяев живущих в различных условиях. В данной статье предлагается обзор биологии зооксантелл и процесс изолирования этих динофлагеллят для научного изучения, чтобы аквариумисты смогли разобраться в сути симбиоза зооксантелл и обитающих в домашних аквариумах кораллов и оценили его значение. 

Когда мы думаем о морских аквариумах, мы часто вспоминаем об освещении. Чтобы удовлетворить потребности своих драгоценных кораллов, аквариумисты оснащают свои системы мощными лампами. При этом многие понимают, что освещение важно для жизнедеятельности так называемых зооксантелл, которые растут внутри полипов кораллов. Но что на самом деле представляют собой зооксантеллы? Для начала, давайте разберемся с их названием. Термин «zooxanthellae» берет начало от греческих слов «zoon», или животное, и «xanth», что означает «желтый» или «золотистый». Другими словами, речь идет о золотистого цвета клетках, которые растут внутри животных. Название «zooxanthella» (ед. число) впервые было использовано Брандтом в 1881 [который, кстати, работал в С.Петербурге - прим. редактора]. 
 
01-small.jpg
  
02-small.jpg
  
03-small.jpg
Zooxanthellae обнаружены у многих видов кораллов – представителей разнообразных родов и семейств.
Сверху вниз: Fungia sp. (Fungiidae), Caulastraea sp. (в настоящее время относится к Merulinidae) и Trachyphyllia geoffroyi (Trachyphylliidae). 
 
В настоящее время уже известно, что зооксантеллы не являются «истинными» водорослями, а принадлежат к типу Dinoflagellata (от греческого слова «dinos», означающего «кружение, вращение», и латинского слова «flagellum», что означает «побег, росток»). Тип Dinoflagellata представляет собой достаточно большую группу одноклеточных организмов, большая часть которых классифицируется как морской планктон. Некоторые организмы живут в симбиотических отношениях с животными, в частности, с кораллами. К таким организмам относятся динофлагелляты рода Symbiodinium, которые встречаются в тканях животных, принадлежащих к типам Mollusca (моллюски тридакны, голожаберные моллюски), Platyhelminthes (плоские черви), Porifera (губки), Protozoa (фораминиферы) и Cnidaria (книдарии: кораллы, морские актинии, гидроиды, медузы). 
  
Виды Symbiodinium spp. обладают очень важным свойством, а именно, способностью к фотосинтезу. Фотосинтез – это процесс превращения неорганического углекислого газа в органические соединения, например, глицерин и глюкозу, посредством использования световой (солнечной) энергии. Для роста кораллов, несущих в своих тканях представителей Symbiodinium, требуется свет, потому что питательные вещества, полученные в результате фотосинтеза, необходимы не только для жизнедеятельности зооксантелл, но и для поддержания энергоемкого процесса кальцификации (построения скелета) самих кораллов. Значение симбиоза “кораллы-динофлагелляты” для процветания коралловых рифов сложно переоценить; внешний вид рифов в триасовый период (250-200 миллионов лет назад) считается непосредственным результатом эволюции этого симбиоза (Muscatine et al. 2005). 

Биология симбиоза «животное – динофлагелляты»

Образование, устойчивость и распад симбиоза
Когда Symbiodinium обитают свободно в океане, они существуют в двух формах (Freudenthal 1962). Первая форма – это подвижная зооспора,которая передвигается при помощи жгутика. Вторая форма – это вегетативная циста, которая является неподвижной, поскольку жгутик у нее отсутствует. Для вегетативных цист, свободноживущих или живущих в симбиозе, характерно бесполое размножение посредством деления клеток, которые производят две или три дочерние клетки. Имеются также свидетельства, что Symbiodinium spp. способны размножаться половым путем (Stat et al. 2006). Вегетативная циста является доминантной формой, когда динофлагелляты живут в симбиозе с животными; согласно имеющимся данным можно предположить, что животное-хозяин использует особые химические сигналы, чтобы удерживать их (цисты) в неподвижном состоянии (Koike et al. 2004). В большинстве случаев симбиоза, зооксантеллы обитают внутри клетки животного-хозяина, отгороженной мембраной, известной как симбиосомальная мембрана (symbiosomal) (Venn et al. 2008). У моллюсков тридакн, однако, зооксантеллы обитают внеклеточно, между клеток моллюска (Ishikura et al. 1999). У кораллов зооксантеллы живут в гастродерме, слое клеток, который покрывает внутреннюю сторону полипов. В последние годы механизмы, лежащие в основе симбиоза кораллов и зооксантелл, изучались лабораторно. В настоящее время ученые выделили шесть этапов симбиоза между книдариями и водорослями: первоначальный контакт, поглощение, сортировка, пролиферация (размножение), устойчивость и, наконец, дисфункция. (Davy et al. 2012). 
  
Сначала свободноживущим зооксантеллам необходимо найти потенциального «хозяина», например, коралл. И хотя некоторые виды кораллов передают свои зооксантеллы своим «отпрыскам» через яйцеклетки - этот процесс называется вертикальной трансмиссией, многим видам приходится искать новых симбионтов в каждом поколении. Личинки и полипы кораллов находят симбионтов в воде – этот процесс называется горизонтальной трансмиссией. Процесс признания зооксантелл в качестве потенциальных симбионтов кораллов еще не до конца изучен; для него необходимо несметное количество «сигнальных» молекул, присутствующих на поверхности клеток обоих партнеров. После того, как клетки кораллов успешно распознали потенциально совместимые зооксантеллы, клетки поглощают их, процесс называется фагоцитозом (от греческого phagein, или поглощать, kytos, или клетка, и osis, что означает процесс). Далее, начинается процесс сортировки, что приводит к перевариванию нежелательных зооксантелл и сохранению подходящих. Предпочтение кораллами определенного типа зооксантелл, или клад, зависит от многих факторов, включая видовую принадлежность кораллов. Когда коралл встречает несовместимые зооксантеллы, происходит иммунная реакция, в результате которой динофлагелляты разрушаются или изгоняются. Подходящие зооксантеллы будут размножаться (пролиферировать) по всей гастродерме коралла, в результате будет образован устойчивый симбиоз. По мере того, как образуется устойчивый симбиоз, зооксантеллы и коралл способны извлекать пользу из взаимоотношений посредством обмена питательными веществами (см. ниже). Однако, если коралл находится под влиянием стресса, например, в результате воздействия слишком высокой температуры или слишком интенсивного освещения, может иметь место феномен, известный как обесцвечивание коралла. Причина возникновения этого феномена заключается в дисфункции симбиоза, его шестой и последней стадии. Считается, что дисфункция в состоянии температурного или светового стресса возникает в результате повреждений фотосинтетического механизма (или фотосистем) зооксантелл, вследствие чего токсические молекулы попадают в ткани коралла (Venn et al. 2008). Эти токсические молекулы представляют собой виды химически активного кислорода, они содержат радикалы супероксида (O2-) и пероксида водорода (H2O2). В качестве ответной реакции на эти токсины, зооксантеллы разрушаются и выводятся из клеток гастродермы, а затем удаляются через рот коралла. 

04-small.jpg

Обзор шести известных стадий симбиоза книдарий и водорослей.
1: первоначальный поверхностный контакт между зооксантеллами и клетками животного-хозяина;
2: поглощение симбионта клетками хозяина;
3: сортировка симбионтов, окруженных мембраной хозяина,
в результате чего происходит принятие или непринятие симбионта;
4: рост симбионта посредством деления клеток в тканях хозяина;
5: устойчивый симбиоз с постоянной популяцией симбионта;
6: дисфункция и распад симбиоза вследствие стресса.
В измененной редакции, источник - Davy et al. (2012). 


05-small.jpg
Предполагаемый механизм распада симбиоза.
Стресс в результате воздействия чрезмерно высокой температуры и интенсивности
света приводит к повреждению фотосистем зооксантелл, что, в свою очередь,
приводит к выработке радикалов супероксида (O2-) и пероксида водорода (H2O2).
В результате повреждаются зооксантеллы и клетки коралла-хозяина, которые разрушают и удаляют зооксантелл;
в результате, коралл обесцвечивается.
В измененной редакции; источник - Venn et al. (2008). 

Разрыв симбиоза «животное - динофлагелляты» под влиянием факторов окружающей среды встречается не так уж и редко. Обесцвеченные кораллы не получают питательных веществ от своих зооксантелл, им необходимо быстро найти новых симбионтов, чтобы остаться в живых. К сожалению, продолжительные и теплые летние периоды зачастую не предоставляют кораллам такой возможности, в этом случае наблюдается массовая гибель кораллов. В аквариумах наблюдались схожие процессы. Многие аквариумисты наблюдали результат влияния стресса от чрезмерной температуры и интенсивности освещения в летний период или после модернизации системы освещения аквариума. Находясь в течение нескольких дней в условиях повышенной температуры воды или чрезмерно интенсивного света, кораллы и актинии могут полностью обесцветиться, в результате аквариум станет бледным и бесцветным. Поэтому очень важно поддерживать в аквариуме постоянную температуру воды, а интенсивность освещения менять постепенно, чтобы у зооксантелл была возможность приспособиться к новым условиям. 
  
Известно, что чувствительность зооксантелл к температуре и освещению зависит от принадлежности к той или иной кладе; при этом, клада D является наиболее толерантной к высокой температуре (Baker et al. 2004). Cкорее всего, это связано с тем, что у зооксантел имеются фотосинтетические мембраны, которые остаются стабильными даже при температуре около 32°C, при этом они не выделяют токсический, химически активный вид кислорода в ткани кораллов при такой высокой температуре (Tchernov et al. 2004). Это объясняет, почему жарким летом одни кораллы обесцвечиваются, а другие – нет. 

Обмен питательных веществ в рамках симбиоза 
До тех пор, пока симбиоз между кораллами и зооксантеллами устойчив, оба партнера извлекают пользу из сложного обмена питательными веществами. Клетки коралла обеспечивают зооксантелл неорганическим углеродом и азотом (углекислый газ, аммоний), которые образуются в результате распада органических соединений, полученных от зооксантелл (глицерин, глюкоза, аминокислоты, жиры) и из окружающей воды (планктон, детрит, растворенные органические вещества). Зооксантеллы, в свою очередь, используют неорганические соединения, полученные от коралла и из морской воды (углекислый газ, бикарбонат, аммоний, нитраты, фосфаты водорода), чтобы производить органические молекулы в процессе фотосинтеза. Большая часть этих органических молекул, известных в настоящее время как продукты фотосинтеза, далее отправляется обратно «хозяину». Подобный обмен питательными веществами между кораллами и зооксантеллами позволяет им эффективно использовать малодоступные в океане питательные вещества. Перемещение (транслокация) насыщенных энергией соединений от зооксантелл к «хозяину» позволяет кораллам выстраивать огромные рифы посредством секреции скелетов из карбоната кальция. 
  
Совершенно очевидно, что своему кораллу-хозяину зооксантеллы передают не просто любые вещества, имеющиеся или производимые в избытке; передача продуктов фотосинтеза от зооксантелл провоцируется кораллом при помощи так называемого "фактора освобождения хозяина (host release factor)", или HRF. HRF представляет собой субстанцию, производимую кораллом, вероятнее всего, некий «коктейль» из особых аминокислот, который способствует освобождению зооксантеллами питательных глицерина и глюкозы (Gates et al. 1995; Wang and Douglas 1997). И на самом деле, если каплю гидросмеси (суспензии) тканей коралла добавить к культуре Symbiodinium, она сразу же провоцирует выброс питательных веществ у динофлагеллятов (Trench 1971). Однако, Дэви и др. (Davy et al., 2012) указывают на тот факт, что HRF не является единым для разных видов: согласно имеющимся свидетельствам, различные виды могут использовать различные типы HRF. 
  
Несмотря на тот факт, что кораллы получают значительное количество органических соединений от своих зооксантелл, результаты исследования показывают, что для поддержания оптимального роста кораллам необходим внешний источник пищи (обзор Houlbrèque and Ferrier-Pagès 2009). Это связано с тем, что кораллам требуются жиры и белок для роста тканей и органической матрицы - так называемой «протеиновой платформы», которая обеспечивает участки для размещения кристаллов карбоната кальция. При условии, что кораллы ежедневно получают достаточное количество зоопланктона, например, ракообразных или артемии, питание получают не только кораллы: небольшое увеличение количества неорганических веществ “подкармливает” зооксантелл. Кроме того, в этом случае стимулируется также процесс обмена питательными веществами в рамках симбиоза. Для некоторых аквариумов, где недостаток кормлений сочетается с усиленной фильтрацией, характерен недостаток питательных веществ, что проявляется в приостановке роста зооксантелл и их последующей гибели. В этой ситуации кораллы обесцвечиваются, поэтому в подобной ситуации необходимо уменьшить степень фильтрации и/или увеличить количество добавляемого в аквариум корма. 
 
06-small.jpg
 
Обзор обмена питательными веществами между одиночным кораллом и клеткой зооксантеллы. Коралл потребляет органические соединения, такие как планктон, детрит (или частицы органических веществ - POM), мочевина, аминокислоты и глюкоза (или растворенные органические вещества - DOM) из морской воды. Кроме того, он дополнительно получает органические молекулы от зооксантелл, в частности, глицерин. Клетки коралла разбивают эти вещества на аммоний и углекислый газ, которые затем поглощаются зооксантеллами. Кроме того, зооксантеллы также получают неорганические соединения из воды, в частности, аммоний (NH4+), нитраты (NO3-), фосфат водорода (HPO42-), бикарбонат (HCO3-) и углекислый газ (CO2), и превращают их в органические молекулы преимущественно в процессе фотосинтеза. Большая часть этих соединений снова поступает к клеткам коралла-хозяина. Такой круговорот питательных веществ между клетками коралла-хозяина и их симбиотическими зооксантеллами позволяет кораллу расти даже в среде с низким содержанием питательных веществ. В измененной редакции, Davy et al. (2012). 

Как изучать зооксантеллы: правила и инструментарий

Поскольку зооксантеллы необходимы для существования рифообразующих кораллов, совершенно очевидно, насколько важно их изучать. Для извлечения зооксантелл, а следовательно, и ценной информации из коралла, требуется определенное обрудование. Первый этап извлечения зооксантелл – взвешивание коралла, при этом используется так называемый метод взвешивания в воде. Каждая колония взвешивается в морской воде постоянной плотности (при температуре 26°C и солености 35 g L-1), при этом колония подвешивается на проводе, соединенном с высокоточными весами. Этот метод наиболее точный, поскольку при взвешивании коралла вне воды истинный вес коралла будет неточным, потому что в любом случае на коралле будет какое-то количество морской воды. Когда каждый коралл был взвешен до и после крепления на ПВХ пластину, в любой момент можно заново подсчитать вес нетто коралла при повторном взвешивании, просто вычитая вес пластины и эпоксидной смолы. 
  
После определения веса коралла в воде, следующий этап – извлечение образца ткани со скелета. При помощи струи воздуха сделать это несложно. Небольшие фрагменты коралла (около 1-2.5 см) помещаются в пластиковые пробирки, и воздушный распылитель (сопло) помещается в пространство между пробиркой и крышкой. В зависимости от морфологии коралла, поток воздуха подается в течение 1- 3 минут, эффективно удаляя все ткани. Когда скелет коралла полностью очищен, он удаляется из пробирки. Скелет далее может использоваться для проведения других исследований, например, для определения белков, составляющих органическую матрицу. 
  
После отделения тканей от скелета в пробирку добавляется искусственная морская вода, пробирка встряхивается до тех пор, пока не будет получена суспензия из тканей коралла. Далее, при помощи центрифуги разделяются ткани коралла и зооксантеллы. Зооксантеллы тяжелее, они будут оседать на дно пробирки - внешне они напоминают коричневатые гранулы. Ткани коралла образуют слегка мутный раствор, супернатант, расположенный над гранулами. Этот супернатант может быть удален при помощи пипетки, или просто вылит, а гранулы зооксантелл ресуспендированы снова в морской воде. Обе части могут быть изучены на энзимную (ферментную) активность, содержание белка и даже ДНК. Часть суспензии с зооксантеллами может использоваться для образования культуры свободноживущих динофлягеллятов для последующего изучения. 
  
Для определиня плотности зооксантелл в коралле, на гемоцитометр пипеткой добавляется небольшое количество суспензии из зооксантелл. Гемоцитометр представляет собой небольшую камеру, содержащую счетную сетку, которая используется также для подсчета бактерий, водорослей и клеток крови. Под микроскопом определяется количество зооксантел на единицу образца. Поскольку известен общий объем образца, можно подсчитать общее количество зооксантелл, изолированных от части коралла. Разделив это количество на вес (или площадь поверхности) коралла, получаем плотность зооксантелл. Этот метод позволяет исследователям определить, как среда коралла влияет на рост зооксантелл. При помощи несложного лабораторного оборудования отделить зооксантеллы от коралла можно даже в домашних условиях. 

07-small.jpg
Коралл подвешивается на проводе для взвешивания под водой. 
  
 
08-small.jpg
При помощи сжатого воздуха можно эффективно отделить ткани коралла от скелета. 


09-small.jpg
Центрифуга позволяет разделить ткани кораллов и симбиотические зооксантеллы. 


10-small.jpg
Важные инструменты: пипетка, пробирки и гемоцитометр. 
  
 
11-small.jpg
Гемоцитометр на предметном стекле микроскопа для определения
плотности зооксантелл в образце тканей коралла. 
  
 
12-small.jpg
Впервые описаны Брандтом в 1881: зооксантеллы.
На фото: зооксантеллы изолированы от рифового коралла Stylophora pistillata.
Увеличение: 100x (без учета масштаба изображения камеры). 

Перспективы исследований в будущем

Даже с учетом того, что нам уже достаточно много известно о зооксантеллах, остается много вопросов для будущих исследований. В частности, более детальное изучение начала и распада симбиоза между кораллами и зооксантеллами. В настоящее время очевидно, что состояние коралловых рифов во всем мире ухудшается, а в основе этой проблемы – хрупкий симбиоз «кораллы-зооксантеллы». Ученым еще предстоит изучить факторы, влияющие на чувствительность зооксантелл и кораллов к провоцирующим стресс условиям, в частности, высокой температуре воды. Кроме того, повышенный интерес вызывает эффект взаимодействия нескольких факторов, где сочетаются, например, температура воды, pH, интенсивность света и питательные вещества, способные привести к обесцвечиванию кораллов. 
 
13-small.jpg
Состояние коралловых рифов (на фото: Рас Кульан, Египет) быстро ухудшается,
а в основе этой проблемы – симбиоз между кораллами и зооксантеллами. 

Когда в следующий раз вы будете любоваться своими кораллами через аквариумное стекло, задумайтесь об этих сложных взаимоотношениях кораллов и зооксантелл; как они позволяют кораллам выстраивать самые крупные естественные структуры на планете и как легко неблагоприятные условия окружающей среды способны разрушить этот альянс кораллов и зооксантелл. 

Первоисточник: www.advancedaquarist.com
Переведено специально для ReefCentral.ru
Если вы увидели этот материал на другом сайте - значит, он был украден.
Просим сообщать о замеченных фактах на info@reefcentral.ru


Количество показов статьи: 17241